Bahan tumbuhan dan patogen
Populasi pemetaan persatuan sorghum yang dikenali sebagai populasi penukaran sorghum (SCP) telah disediakan oleh Dr. Pat Brown di Universiti Illinois (kini di UC Davis).Ia telah diterangkan sebelum ini dan merupakan koleksi garisan pelbagai yang ditukar kepada fotoperiod-insensitivity dan kedudukan yang lebih kecil untuk memudahkan pertumbuhan dan perkembangan tumbuhan dalam persekitaran AS.510 garisan daripada populasi ini digunakan dalam kajian ini walaupun disebabkan percambahan yang tidak baik dan isu kawalan kualiti yang lain, tidak semua garisan digunakan dalam analisis ketiga-tiga ciri.Akhirnya data daripada 345 baris digunakan untuk analisis tindak balas kitin, 472 baris untuk tindak balas flg22, dan 456 untuk rintangan TLS.B. cookeistrain LSLP18 diperolehi daripada Dr. Burt Bluhm di Universiti Arkansas.
Pengukuran tindak balas MAMP
Dua MAMP berbeza telah digunakan dalam kajian ini flg22, (Katalog Genscript# RP19986), dan kitin .Tanaman sorgum ditanam dalam sisipan yang diletakkan di atas rumah pangsa yang dipenuhi dengan tanah (33% Sunshine Redi-Earth Pro Growing Mix) di rumah hijau.Tumbuhan disiram sehari sebelum pengumpulan sampel untuk mengelakkan kelembapan daun tambahan pada hari pengumpulan.
Garisan telah rawak dan, atas sebab logistik, telah ditanam dalam kelompok 60 baris.Bagi setiap baris, tiga 'pasu' ditanam dengan dua biji setiap baris.Kumpulan berikutnya telah ditanam sebaik sahaja kumpulan sebelumnya telah diproses sehingga keseluruhan populasi telah dinilai.Dua larian eksperimen telah dijalankan untuk kedua-dua MAMP dengan genotip dirawak semula dalam setiap dua larian.
Ujian ROS telah dijalankan seperti yang diterangkan sebelum ini.Secara ringkas, untuk setiap baris, enam biji ditanam dalam 3 pasu yang berbeza.Daripada anak benih yang terhasil, tiga dipilih berdasarkan keseragaman.Anak benih yang kelihatan luar biasa atau jauh lebih tinggi atau lebih pendek daripada majoriti tidak digunakan.Empat cakera daun berdiameter 3 mm dipotong daripada bahagian terluas daun ke-4 tiga pokok sorgum berumur 15 hari yang berbeza.Satu cakera setiap daun daripada dua tumbuhan dan dua cakera daripada satu tumbuhan, dengan cakera kedua menjadi kawalan air (lihat di bawah).Cakera itu diapungkan secara individu pada 50 µl H20 dalam plat 96-telaga hitam, dimeterai dengan pengedap aluminium untuk mengelakkan pendedahan kepada cahaya, dan disimpan pada suhu bilik semalaman.Keesokan paginya larutan tindak balas dibuat menggunakan probe chemiluminescent 2 mg/ml L-012 (Wako, katalog # 120-04891), 2 mg/ml lobak pedas peroksidase (Jenis VI-A, Sigma-Aldrich, katalog # P6782), dan 100 mg/ml Chitin atau 2 μM Flg22.50 µl larutan tindak balas ini telah ditambah kepada tiga daripada empat telaga.Telaga keempat ialah kawalan olok-olok, yang mana penyelesaian tindak balas tidak termasuk MAMP telah ditambah.Empat telaga kosong yang hanya mengandungi air juga dimasukkan ke dalam setiap plat.
Selepas menambah larutan tindak balas, pendarfluor diukur menggunakan pembaca plat mikro pengesanan berbilang SynergyTM 2 (BioTek) setiap 2 minit selama 1 jam.Pembaca plat mengambil ukuran luminescence setiap 2 minit selama 1 jam ini.Jumlah kesemua 31 bacaan dikira untuk memberikan nilai bagi setiap telaga.Nilai anggaran untuk tindak balas MAMP bagi setiap genotip dikira sebagai (nilai pendaran purata bagi tiga telaga eksperimen—nilai telaga olok-olok) -tolak purata nilai telaga kosong.Nilai telaga kosong secara konsisten menghampiri sifar.
Cakera daun daripadaNicotiana benthamiana, satu talian sorghum responsif tinggi (SC0003), dan satu talian sorghum responsif rendah (PI 6069) juga dimasukkan sebagai kawalan dalam setiap plat 96-telaga untuk tujuan kawalan kualiti.
B. cookeipenyediaan inokulum dan inokulasi
B. cookeiinokulum disediakan seperti yang diterangkan sebelum ini.Secara ringkas, biji sorgum direndam dalam air selama tiga hari, dibilas, dicedok ke dalam kelalang kon 1L dan diautoklaf selama sejam pada 15psi dan 121 °C.Biji-bijian itu kemudiannya disuntik dengan kira-kira 5 ml miselia macerated daripada kultur segarB. cookeiLSLP18 diasingkan dan dibiarkan selama 2 minggu pada suhu bilik, goncangkan kelalang setiap 3 hari.Selepas 2 minggu, biji sorgum yang diserang kulat dikeringkan di udara dan kemudian disimpan pada suhu 4 °C sehingga inokulasi di lapangan.Inokulum yang sama digunakan untuk keseluruhan percubaan dan dibuat segar setiap tahun.Untuk inokulasi, 6-10 bijirin yang diserang dimasukkan ke dalam lingkaran tumbuhan sorgum berumur 4-5 minggu.Spora yang dihasilkan daripada kulat ini memulakan jangkitan pada pokok sorgum muda dalam masa seminggu.
Penyediaan benih
Sebelum ditanam di ladang benih sorghum dirawat dengan racun kulat, racun serangga, dan campuran safener yang mengandungi ~ 1% racun kulat Spirato 480 FS, 4% racun kulat Sebring 480 FS, 3% penyelamat benih Sorpro 940 ES.Kemudian benih dikeringkan di udara selama 3 hari yang memberikan salutan nipis campuran ini di sekeliling benih.Alat selamat membenarkan penggunaan racun herba Dual Magnum sebagai rawatan pra-kemunculan.
Penilaian rintangan Bintik Daun Sasaran
SCP telah ditanam di Stesen Penyelidikan Tanaman Pusat di Clayton, NC pada 14–15 Jun 2017 dan 20 Jun 2018 dalam reka bentuk blok lengkap rawak dengan dua replikasi eksperimen dalam setiap kes.Eksperimen telah ditanam dalam baris tunggal 1.8 m dengan lebar baris 0.9 m menggunakan 10 biji setiap petak.Dua baris sempadan telah ditanam di sekeliling pinggir setiap eksperimen untuk mengelakkan kesan tepi.Eksperimen telah disuntik pada 20 Julai 2017 dan 20 Julai 2018 di mana tumbuhan sorgum berada pada peringkat pertumbuhan 3. Penarafan diambil pada skala satu hingga sembilan , di mana tumbuhan yang tidak menunjukkan tanda-tanda penyakit telah dijaringkan sebagai sembilan dan sepenuhnya. tumbuhan mati telah dijaringkan sebagai satu.Dua penarafan diambil pada 2017 dan empat bacaan pada 2018 bermula dua minggu selepas inokulasi setiap tahun.sAUDPC (kawasan piawai di bawah lengkung perkembangan penyakit) telah dikira seperti yang diterangkan sebelum ini.
Masa siaran: Apr-01-2021